血清分瓶注意事項

三、胎牛血清的選擇

市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細胞培養的人，難以分辨血清質量的優劣。本人根據十多年來血清生產銷售的經驗，總結如下：

一、外觀

拿到血清，zui先接觸的是血清外觀，對于缺少細胞培養經驗的人來說，外觀的判斷尤為重要

1、顏色

根據血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現出黃色或紅色，我國的細胞培養用血清標準是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標的意義在于能體現出采血過程的嚴謹規范程度，良好的操作能降低血清的溶血。

國產血清的采血點很分散，大多是由屠戶采血后馬上離心收集，所以很少會有溶血，表現出明亮的蠟黃色，當然，國產血清也很少有標準意義上的胎牛血清。

進口胎牛血清或多或少總有點溶血，因為真正的胎牛血清凝血功能差，紅細胞容易破裂。

總的來說，國產的血清呈現出蠟黃。進口的血清，質量的呈現出談黃、微紅色，如Gibco 16000，差點的呈現出橘紅色或鮮紅色。當然，熱滅活血清或保存不當的血清，由于血紅蛋白的破壞氧化，會呈現出暗紅，甚至咖啡色。

2、沉淀

很多血清客戶，會發現進口血清有沉淀，從而懷疑血清的質量問題，這是沒有根據的。

血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產生，對血清質量沒有任何影響，沉淀的產生原因很多，和廠家的加工生產方式密切相關。

國產的血清，大多來自北方，由于價格低廉，保存環境都不好，從采血、冷凍、運輸到生產會經過多次凍融，每次凍融過程，就會析出部分纖維蛋白沉淀，這樣，血清成品過濾后看起來反而更加的“干凈”，很少有沉淀產生。

進口的胎牛血清，過濾分裝前很少會反復凍融，生產后的成品也是清澈的，但隨著時間的推移，血清中的大量纖維蛋白會析出形成沉淀。當然，進口的新生牛血清，一般牛齡都在2周左右，血清中的各種蛋白含量明顯偏高，生產后血清可能會渾濁，甚至有大量沉淀。

當然，購買回來的血清都是冰凍狀態，使用時需要融化，融化過程在溫度較低的狀態下慢慢進行，否則沉淀相對較多，雖然沉淀并不直接影響血清的質量，但對細胞的顯微觀察有一定的阻礙。

3、澄清度

進口胎牛血清由于蛋白和脂類等物質含量低，表現為稀薄、清淡，而國產血清，因為絕大多數是新生牛血清，相對而言更加粘稠，顏色略深，這對于初步接觸血清的人很難判斷，但把兩者進行對比，可容易分辨。

四、胎牛血清使用中的常見問題

1、 如何儲存和解凍血清才不會使產品質量受損?

將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。

長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。

我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。

2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產品性質。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。

4、 如何避免血清中產生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產生：

(1)解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。

(2) 血清分裝凍存時，須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。

(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質。

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

(6) 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。